شناسایی همزمان ویروسهای pvx,plrv,pvy و pva با استفاده از آزمون das-elisa و ردیابی نژاد pvyntn با استفاده از روش rt-pcr در مزارع سیب زمینی استان خراسان رضوی

به منظور بررسی و شناسایی همزمان چهار ویروس مهم سیب زمینی طی تابستان 1386تعداد 435 نمونه از غده های 32 مزرعه سیب زمینی واقع در شهرستانهای استان خراسان رضوی به صورت تصادفی جمع آوری شد. سپس جوانه های هرغده با آزمونdas- elisa مورد بررسی قرار گرفتند و مشخص گردید 76 نمونه به pvy، 47 نمونه به plrv، 44 نمونه به pva و 13 نمونه آلوده به pvx بودند. نتایج نشان داد که آلودگی همزمان فقط در25نمونه وجود داشت که 2نمونه آلودگی همزمان به plrv+pvx،14 نمونه به plrv+pvy،2 نمونه به pvy+pva، 3 نمونه به pvx+pvy آلودگی داشتند. بعلاوه تعداد 2 نمونه به طور همزمان به ترکیبی از ویروسهای pvy+pva+plrv و 2 نمونه به ویروسهای pvy+plrv+pvx آلوده بودند. در این تحقیق نمونه ای که آلودگی همزمان به 4 ویروس pvy+plrv+pva+pvx داشته باشند یافت نشد. همچنین برای شناسایی و ردیابی نژادpvyntn تودهrna کل 40گیاه آلوده به pvy که بیشترین میزان جذب در طول موج405نانومتر را در دستگاه الیزا خوان نشان دادند استخراج گردید. نژاد pvyntn باعث ایجاد بیماری لکه حلقوی نکروتیک غده سیب زمینی (ptnrd)می شود. اغلب بوته ها در زمان گیاهچه ای و غده ها در زمان برداشت بدون علائم و.معمولاً علائم در زمان پس از برداشت در شرایط انبار نمایان می شوند.واکنش زنجیره ای پلیمراز نسخه برداری معکوس، rt-pcr ابزاری دقیق و قابل اعتماد برای تمایز و شناسایی نژاد pvyntn در تائید علائم و ردیابی آلودگی در بافتهای بدون علائم محسوب می شود به همین منظور با کمک 3 آغازگر اختصاصی طراحی شده برای ناحیه ژن پروتئین پوششیcp، cdna مربوطه ساخته و برای انجام آزمون rt-pcr مورد استفاده قرار گرفت. نمونه های آلوده به pvy به همراه آغازگرهای mor2 و mor3در محدوده?569-bp و جدایه های متعلق به نژاد pvyntn به همراه آغازگرهای mor1 وmor2 درمحدوده 334-bp ایجاد باند نمودند.